Annexin V-FITC

 在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡早期，膜磷脂酰丝氨酸（ps）由脂膜内侧翻向外侧。annexin v是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此annexin v被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。在细胞发生凋亡时，膜磷脂酰丝氨酸外翻的发生早于细胞核的变化，而此时propidium iodide（pi）不能通过细胞膜。

细胞坏死时，虽然也会发生磷脂酰丝氨酸外翻，但此时细胞膜的通透性明显增加，pi等核酸染料进入细胞与细胞核中的核酸结合，发出红色荧光。所以annexin v-fitc(绿色荧光)常与鉴定细胞死活的核酸染料（如pi）合并使用，来区分凋亡细胞与死亡细胞。

技术步骤

1. 离心收集细胞，微量离心机转速1000 rpm，离心时间5 min，弃培养基。

2. 用冷pbs洗涤细胞两次。

3. 用400 μl1× binding buffer悬浮细胞，浓度大约为1×106 cells/ml。

4. 在细胞悬浮液中加入5 μllannexin v-fitc，轻轻混匀后于2~8°c避光条件下孵育15min。

5. 加入10 μl pi后轻轻混匀于2~8°c避光条件下孵育5 min。

6. 在1小时内用流式细胞仪或荧光显微镜检测。

服务周期与交付内容

我公司在正式接受实验委托2个星期左右完成实验并提供实验报告。

完整的实验报告，包括实验过程、所用实验仪器与试剂、流式结果及相关数据。

服务说明

需提供细胞类型，处理条件；

服务承诺：

1. 检测结果准确、客观、可信，但不能确保一定要得到某特定结果。

2. 在规定时间内以Zui快速将实验完成