DNA ladder检测服务

服务项目简介

细胞核染色质dna断裂是细胞凋亡的标志特征。在细胞发生凋亡时，核酸内切酶被激活，选择性降解染色质dna，形成50-300 kb的大片段，并进而在核小体连接处断裂，形成180-200 bp或其整倍数的dna片段，这些dna片段可从细胞中提取出来，通过琼脂糖凝胶电泳，溴化乙啶染色呈现为梯状条带（dna ladder），并据此判断细胞凋亡产生。

技术步骤

1. 离心收集105~106细胞（1500×g，5min）于1.5ml微量离心管中；用pbs洗涤细胞两次（离心1500×g，5min），弃上清；

2. 沉淀的细胞中加入100 μl lysis buffer，涡旋振荡器上剧烈混合10秒，离心1000×g，5min，移上清于另一1.5ml微量离心管中；

3. 沉淀再加入100μl lysis buffer重复上步，合并两次的上清液；

4. 在上述合并的上清液中加入20μl solution a，再加入20μl enzyme a，55℃反应1小时；

5. 加入20μl enzyme b，37℃，1小时；

6. 加入130μl precipitant和950μl冷乙醇，混匀，置-20℃，1小时以上或过夜；

7. 4℃，12, 000~14, 000 rpm离心15~30min，小心地弃去上清，收集沉淀的dna；

8. 加入0.5ml 70%的冷乙醇，洗dna沉淀，再12, 000~14, 000 rpm离心20min；弃上清，dna沉淀于室温干燥10 min后，加入10~15μl te buffer，充分搅拌溶解dna；

9. 取上述10~15μl样品加入2~3μl loading buffer，1.5%琼脂糖凝胶电泳（凝胶和电泳缓冲液tbe均加入0.5μg/ml的溴化乙啶），5v/cm电泳1小时，紫外灯下观察并拍照。

服务周期

我公司在正式接受实验委托1~2周左右完成实验并交付实验结果。